PCR实验室分区设计与压差控制

PCR实验室分区设计，压差控制.得创实验室工程专业从事PCR实验室工程规划，设计，施工一条路净化工程公司，欢迎来电咨询：027-82289886
我们之前碰到过一些客户，说做PCR实验总是出现假阳性，明明没有加模板最后却扩出了产物。如果这种现象频频出现，就要注意一下操作环境了。如果你去百度上搜索“PCR出现假阳性了怎么办”，下面给出的建议一定会有防止交叉污染这条建议。有人说模板DNA是大分子，溶于去离子水中，怎么会无缘无故跑出来污染环境呢？小编将会一一解释。

PCR实验室设计要点
PCR实验室可以是分散的或组合的。完成一组PCR实验中，通常要经过四个实验过程：试剂制备、样品处理、核酸扩增和产品分析，如果需要实验工艺，还应增加样品粉碎过程。
1、分散形式PCR实验室
所谓分散形式PCR实验室是指完成上述实验过程的实验室。对于这种形式的布局，PCR实验室，因为每个实验之间不容易相互干扰，所以不需要特殊要求。
2、组合形式PCR实验室
所谓组合形式PCR实验室，是指完成PCR四个实验过程的实验室布置相邻，形成独立实验区的形式。对于组合形式PCR实验室对整体布局和屏障系统有一定的要求，因为每个实验室的集中布置容易造成相互干扰。每个房间的入口处都设有缓冲室，以减少室内外空气交换。
实验室对PCR分享一些实验室建设的经验：
试剂止外界含有核酸气溶胶的空气进入，造成污染，试剂配制室和样品处理室应呈微正压；
正压效应可以通过控制进风量大于排风量来实现。
核酸扩增室和产品分析室应为微负压，以防止含有核酸的气溶胶扩散到污染试剂和样品中。通过控制排气量大于进气量，可达到负压效应。
理想情况下，PCR实验室缓冲室内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向室内。PCR实验室进气由原中央空调控制，要求在指定点安装中央空调出风口，地面铺设后高度为2600mm处。
如果使用荧光PCR仪器、扩增室和产品分析室可合并。
如果允许房间深度，可以设置PCR内部专用走廊。需要指出的是，在减少室内外空气交换方面，缓冲间比专用走廊更有意义。
每个区域之间应有一个单向过程流、物流、人流和气流，形成单向过程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染。
包括天花板在内的实验室墙体应结构牢固，气密性好；所有内角应采用圆弧线过渡；墙体内壁光滑，不吸附，耐腐蚀，易于清洁消毒；地面材料应满足无缝、无渗漏、光滑、耐腐蚀的要求。

1、物流：在试剂准备区与标本制备区、标本制备区与PCR扩增区之间，以及扩增区域和纯化区之间设计有电子连锁不锈钢传递窗，以单向进行试剂、标本等物品传送，配制的试剂通过单向传递窗由试剂准备区传递到标本制备区，处理过的标本通过单向传递窗由标本制备区传递到PCR扩增区，按照工艺流程逐次传递，避免返流。单向物品传送系统既保障了标本试剂不受污染，又保障了标本试剂不污染环境。
2、人流：人员通过闸间分别进入各自实验区域，进出各实验区域需要在闸间区域更换洁净工作服，手消毒等。

按国家卫生部的要求，各实验区域必须是相互独立的，不能直通，每个独立实验区设有专门的闸间供工作人员换工作服和鞋，进入各工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从左边试剂准备区，标本制备区，扩增反应一区，纯化区，扩增反应二区到后纯化区，避免发生交叉污染。

压差设计PCR实验室应设计为负压洁净室，通过压差控制，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并且降低扩增产物对人员和环境的污染。各个实验室与非洁净区之间的闸间保持正压，＞10Pa，实验与闸间之间的气流组织方向为：试剂准备区空气流向闸间，标本制备区流向闸间，而PCR扩增区气流方向由闸间流向PCR扩增区，纯化区同理；同时按照试剂单向流方向，各个实验室之间设计不同压力梯度来实现单向气流组织方向，由试剂准备区（+20Pa）、标本制备区（+15Pa）、扩增反应一区（-5Pa）、纯化区（-10Pa）、扩增反应二区（-20Pa）、到后纯化区（-25Pa）压力逐渐降低，形成单向负压压力梯度。

依据工程图纸，因为每一个实验室的集中化合理布局，非常容易造成互相影响，因而，我们在缓存室、实验室区域、实验室区域和实验室区域中间的相对性压力差不小于5pa，在缓存室和实验室区域选用单独的中央空调循环系统空气系统软件，设定正压，使房间内空气不流入户外，室外空气不流入房间内，避免人员出入导致的室内室外空气互换。缓冲区域正压>区域（制剂制取）微正压>区域（样本解决）微正压，避免含Dna气溶胶的空气根据传送对话框进到，导致环境污染；区域（胀大和产品分析）为微负压，避免含Dna的气溶胶蔓延到环境污染制剂和样本中。这保证 每一个区域都是有一个单方面的研究全过程流、货运物流、人流量和气旋，产生一个单边全过程的防护天然屏障，并避免试验操作过程中的互相影响。

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